酶聯免疫試劑盒采用的是兩步競爭法，樣品中的游離磺胺與酶標板上的包被抗原先競爭結合磺胺特異抗體（磺胺類藥物一抗），磺胺特異抗體再與酶標記二抗結合，通過洗滌洗掉未結合的磺胺特異抗體、酶標記二抗，再通過酶的專一性顯色劑顯色，根據顯色的深淺來判斷樣品中磺胺含量。根據競爭性原理，如果樣品中的游離磺胺量少，則酶標記的磺胺結合的多，顯色深，反之，則顯色淺。檢測時設置標準曲線，通過標準曲線測定樣品中磺胺的含量。
　　酶聯免疫試劑盒是酶免疫測定技術中應用廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA(酶聯免疫吸附試驗)法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。
　　酶聯免疫試劑盒注意事項：
　　1.嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
　　2.洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
　　3.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
　　4.底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
　　5.避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
　　6.在儲存和溫育時避免強光直接照射。
　　7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
　　8.任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
　　9.不能使用過期產品。
　　10.如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
　　酶聯免疫試劑盒貯存方式：
　　保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。