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    上海撫生兔ELISA試劑盒操作及保存方法
    點擊次數(shù):1298 更新時間:2019-07-18

                                   上海撫生兔ELISA試劑盒操作及保存方法

     

    每當(dāng)暑假一到,我都會很高興.想到有兩個月的時間可以不用上課,那簡直就是一年當(dāng)中美好的時光了.  每當(dāng)暑假一到,我都會很高興.想到有兩個月的時間可以不用上課,那簡直就是一年當(dāng)中美好的時光了. 小編接下來介紹 兔ELISA試劑盒操作及保存方法

     

    樣品收集、處理及保存:

     

      1、細(xì)胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

     

      2、細(xì)胞:用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104

     

      -106/ml 左右,通過反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或者細(xì)胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。

     

      3、血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。

     

      4、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上

     

      清。

     

      5、體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

     

      6、組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,稱取重量0、5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000

     

      rmp離心20 分鐘,收集上清進(jìn)行檢測。

     

      7、樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

     

      8、保存:如果樣品不能立即檢測,應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

     

      兔ELISA試劑盒操作步驟:

     

      1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

     

      2、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

     

      3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

     

      4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

     

      5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

     

      6、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

     

      7、溫育:操作同3。

     

      8、洗滌:操作同5。

     

      9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。

     

      10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

     

      11、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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