免疫組化（IHC）是利用抗原與抗體的特異性結(jié)合原理和特殊的標記技術(shù)，通過化學反應使標記抗體顯色，對組織細胞內(nèi)的特異性抗原進行定位、定性、定量檢測的一門技術(shù)。本文主要總結(jié)二抗原理及其特點，以提供更好的選擇。

                                               IHC常用酶標二抗原理圖

1. SABC法

原理：SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)*的高度親和力這一生物學性質(zhì)，先將生物素與辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合，形成生物素化HRP，然后與鏈酶親和素按一定比例混合，形成SABC復合物。用生物素化二抗與第一抗體結(jié)合，再與SABC復合物聯(lián)結(jié)形成抗原～抗體～生物素化二抗～ SABC復合物。最后用底物顯色劑顯色。

特點：該法具有靈敏度高以及低背景染色等特點。

2. SP法

原理：根據(jù)生物素(Biotin) 與鏈霉親和素(Streptavidin)具有強結(jié)合力的原理設(shè)計。在一抗（兔源與鼠源）與相應的靶抗原結(jié)合后，生物素化標記的抗多價二抗與一抗特異結(jié)合；二抗上標記的生物素與標記了辣根過氧化物酶（HRP）的鏈霉親和素結(jié)合，形成抗原～特異性一抗～生物素化的二抗～HRP 標記的鏈霉親和素復合物。

特點：該法孵育時間短（通常為10min），靈敏度高以及低背景染色等特點。

3. Polymer酶標二抗法

原理：該法采用一段多聚氨基酸聚合物做為載體鏈，將該多聚物與二抗結(jié)合，然后可再標記上多個HRP/AP酶分子，所以同樣具有很高的信號放大作用。

特點：靈敏度高；操作步驟簡單；無需進行內(nèi)源性的生物素封閉。

4. 直接酶標二抗法

該法是將HRP/AP酶分子直接標記于二抗上。因此需要普通的酶標二抗即可完成。實驗簡單，成本低，但是因為沒有信號放大作用，所以對很多表達豐度不是很高的抗原就可能檢測不到。