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    腦微血管內皮細胞培養注意事項

    點擊次數:1165 發布時間:2018/11/2
    提 供 商: 上海撫生實業有限公司 資料大?。?/td>
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    腦微血管內皮細胞是血腦屏障的主要組成成分,能夠限制可溶性物質和細胞等從血液進入大腦。大腦微血管內皮細胞與外周內皮細胞相比具有一些相同特性。如:1)腦微血管內皮細胞存在許多細胞間緊密連接,產生很高的跨內皮阻抗,延遲細胞旁的通量;2)腦微血管內皮細胞缺乏內皮細胞的窗孔結構,其液相物質胞飲水平較低;3)腦微血管內皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導轉運系統,從而產生 “兩極分化”的表現型。 與外周內皮細胞相同,大腦微血管內皮細胞表面表達細胞粘附分子,調控白細胞進入大腦。由于微血管內皮細胞的器官特異性,內皮細胞通常取源于疾病研究的相關組織。
    人腦微血管內皮細胞(HBMEC)提取于人腦組織,提取純化之后立即凍存。每管含有細胞數 >5×105 cells/ml,此細胞通過vWF/Factor VIII 和CD31 (P-CAM)免疫熒光染色驗證,經測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

    腦微血管內皮細胞, 細胞培養注意事項:

    1、實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,且即使培養基相同亦不共享培養基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后,再進行下一個細胞株之操作。

    2、無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在抬面之中央無菌區域,勿在邊緣之非無菌區域操作。

    3、小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

    4、工作人員應注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作,并選擇適當等級之無菌操作臺(至少ClassⅡ)。操作過程中,應避免引起aerosol之產生,小心毒性藥品,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳針頭之傷害等。

    5、定期檢測下列項目:5.1CO2鋼瓶之CO2壓力5.2CO2培養箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。5.3.無菌操作臺內之airflow壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA過濾膜,預濾網(300小時/預濾網,3000小時/HEPA)。6.水槽可添加消毒劑(Zephrin1:750),定期更換水槽的水

    6、粉末培養基配制好后(加了血清),一般在4度盡量不要超過1個月,如在-20度存放時間可長一些,但也不要超過3-4個月,可能對于永生化細胞株來說要求不是太高,細胞嬌弱,放置時間不宜過長。

    7、開紫外線照射臺的時候,就將培養基、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫。這樣40分鐘后,溫度也升上來了。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱。一定要注意水浴鍋的衛生,有的常年不清洗,里面很臟,容易在外面瓶身上吸附大量細菌。因此用它的也一定要勤換水。從水浴鍋拿出后,找個毛巾擦干上面的水。

     
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