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  • 產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

    Elite樣本保存液

    簡要描述:

    Elite樣本保存液公司正在出售的產(chǎn)品:人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞 神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43封閉多肽 產(chǎn)克雷伯菌PCR檢測試劑盒 雞1,3-βD葡葡糖苷(1,3-βD-Glu)試劑盒elisa α淀粉比色法檢測試劑盒 爪哇香菇 G蛋白偶聯(lián)受體γ4抗體

    更新時間:2025-07-01

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    Elite樣本保存液

    商品屬性:

    產(chǎn)品名稱

    規(guī)格

    貨號

    Elite樣本保存液

    50次反應(yīng)/1ML

    A-Tq3128

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    PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?

    試劑:
    模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程,用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴(kuò)增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛,可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗(yàn)步驟,常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
    設(shè)備:
    PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制;電泳槽:用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

    PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn):

    PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個循環(huán)組成,每個循環(huán)包括以下3個步驟:

    一、變性:

    利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

    二、退火或稱接合,復(fù)性:

    在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘。

    三、延伸:

    DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

    PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:

    1、變性溫度和時間:

    保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜WC整個PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

    2、復(fù)性溫度和時間:

    PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

    3、延伸溫度和時間:

    一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間,可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。

    4、循環(huán)數(shù):

    其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴(kuò)增增加。

    公司正在出售的產(chǎn)品:

    腦膜炎奈瑟菌A群染料法熒光定量PCR試劑盒

    B細(xì)胞受體ELISA試劑盒 BCR免費(fèi)代測試劑

    基因探針法熒光定量PCR試劑盒

    同性戀螺桿菌PCR檢測試劑盒價(jià)格

    泛關(guān)聯(lián)蛋白2ELISA試劑盒 UBAP2免費(fèi)代測試劑

    鴿副粘病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)

    疏螺旋體通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    TBP結(jié)合轉(zhuǎn)錄向下調(diào)節(jié)因子1ELISA試劑盒

    庫皮科斯病毒PCR檢測試劑盒

    小腸結(jié)腸耶爾森菌PCR檢測試劑盒

    芳基硫酯JELISA試劑盒

    口蹄疫病毒Asia1亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    牛鼻炎病毒A型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

    分揀連接蛋白16ELISA試劑盒

    人多瘤病毒6探針法熒光定量PCR試劑盒

    腦膜炎奈瑟菌A群染料法熒光定量PCR試劑盒

    封閉蛋白19ELISA試劑盒

    衣氏放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    腦膜炎細(xì)菌多重PCR檢測試劑盒

    鈣蛋白14ELISA試劑盒

    人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒W家族染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    牛鼻炎病毒型PCR檢測試劑盒

    鈣黏蛋白9ELISA試劑盒

    姜黃染料法PCR鑒定試劑盒

    牛病毒性腹瀉病毒2PCR檢測試劑盒直銷

    甘露糖ELISA試劑盒

    人鼻病毒核檢測試劑盒

    腦膜炎奈瑟菌血清群YPCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

    干擾調(diào)節(jié)因子8ELISA試劑盒

    庫蠓通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    梅毒螺旋體梅毒亞種探針法熒光定量PCR試劑盒

    α半乳糖苷(αGAL)ELISA試劑盒

    人類白細(xì)胞抗原(HLA-B)核檢測試劑盒

    馬皰疹病毒4型(EHV-IVPCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)

    人凝血Ⅹ(FⅩ)檢測試劑盒elisa

    單純皰疹病毒1型染料法熒光定量PCR試劑盒

    口蹄疫病毒通用探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

    G蛋白偶聯(lián)膽汁受體1(GPBAR1)試劑盒ELISA

    解沒食子鏈球菌PCR檢測試劑盒

    馬蛔蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

    人丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原(HCV core Ag)試劑盒ELISA

    Elite樣本保存液雞傳染性喉氣管炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

    布魯氏桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    人泛連接(E3/UBPL) 試劑盒 ELISA

    人皰疹病毒型PCR檢測試劑盒

     


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